Práctica 17: Anaerobiosis

ANAEROBIOSIS

Objetivo
El objetivo de la práctica es ver el crecimiento de un microorganismo sin oxígeno

Fundamento
Para realizar esta práctica tenemos que utilizar una cubeta que nos ayudará a proporcionar una condiciones anaerobias para que podamos ver el crecimiento de un microorganismo en estas condiciones.

Materiales
  • Hisopo estéril

  • Mechero bunsen

  • Asas de siembra estériles



Muestra
  • Exudado bucal
Reactivos
  • Sobre de anaerobiosis 

  • Placa de agar chocolate


Aparataje
  • Estufa 

  • Cubeta de anaerobiosis

Procedimiento
  1. Encendemos el mechero bunsen para crear un ambiente estéril
  2. Recogemos la muestra introduciendo el hisopo estéril en la boca
  3. Sembramos con el hisopo por agotamiento de estrías en la placa de agar chocolate 
  4. La metemos en la cubeta
  5. Ponemos el sobre de anaerobiosis, que se encargará de consumir todo el oxígeno
  6. Metemos la cubeta cerrada en la estufa a 37ºC durante 24 horas






- Tinción de gram
1.Una vez pasadas las 24 horas, sacamos la cubeta de la estufa de 37ºC y la abrimos. Podemos observar como ha crecido nuestro microorganismo y podemos ver sus colonias.
2. Para identificarlo haremos una tinción de gram:
- Hacemos una extensión de nuestra placa con una gota de SSF
- Secamos y fijamos en la llama azul del mechero

- 1 minuto con cristal violeta, lavamos 
- 1 minuto con lugol y lavamos
- 20 segundos con decolorante y lavamos muy bien
- 1 minutos y 30 segundos con safranina y lavamos
- Dejamos secar al aire
3. Una vez seco, observamos al microscopio










Lectura y resultado
Se pueden observar cocos gram negativos




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