Práctica 4: Frotis y tinciones simples. Observación de gérmenes muertos

Frotis y tinciones simples. Observación de gérmenes muertos

Objetivo 
Los diferentes objetivos de esta práctica son:

1. Realizar extensiones o frotis bacterianos a partir de muestras sólidas o líquidas
2. Realizar una tinción simple de las bacterias y levaduras presentes en distintas muestras naturales
3. observar la morfología bacteriana y comenzar a distinguir los diferentes tipos de agrupaciones existentes
4. Practicar con el microscopio empleando el máximo aumento, aplicando correctamente el aceite de inmersión y regulando adecuadamente el condensador y el diafragma.

Fundamento 

1. El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A nivel industrial la fermentación se realiza añadiendo a la leche una mezcla de Streptococcus termophilus, que producepoc ácido, pero es muy aromático y Lactobacillus bulgaricus, que es muy adificante. 
2. Las levaduras son hongos microscópicos unicelulares. En la industria son importantes por su capacidad de realizar la fermentación de hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias como: pan, vino, cerveza (Saccharomyces ceresvisiae). 
3. El sarro dental es un depósito consistente y adherente, formado por restos proteícos, sales minerales y bacterias que se localizan sobre el esmalte de los dientes. En la cavidad bucal abundan saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 

Materiales 

• Asa de siembra y gradilla

• Portaobjetos 

• Pinzas de madera 

• Mechero bunsen 

• Hisopo

Reactivos 

• Colorantes para tinción: cristal violeta, safranina, azul de metileno

• Agua destilada

Aparataje 

• Microscopio

Muestras 

• Yogurt

• Levadura de cerveza

• Sarro dental 
• Ultra leviura

Procedimiento 

- Levaduras 

1. Encendemos el mechero bunsen para crear una zona estéril en la que poder trabajar 
2. Flameamos el asa de siembra
3. Con el asa flameada depositamos una gota de agua destilada sobre un portaobjetos 
4. Flameamos el asa de nuevo 
5. Tomamos una pequeña porción de levadura de cerveza, la suspendemos y la homogeneizamos en la gota de agua, y realizamos el frotis.
6. Secamos al aire
7. Fijamos con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama azul del mechero. 
8. Teñimos con safranina durante 1-2 minutos 
9. Lavamos la tinción con agua y dejamos secar apoyada sobre una superficie inclinada sobre un papel 
10. Observamos primero con el objetivo de 10x para hacer un barrido y después con el de 100x poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión. 

- Bacterias del sarro dental

1. Flameamos el asa de siembra 
2. Con el asa flameada depositamos una gota de agua estéril sobre un portaobjetos limpios 
3. Flameamos el asa de nuevo y la dejamos en la gradillla
4. con un hisopo estéril tomamos una pequeña porción de sarro dental y lo suspendemos y homogeneizamos en la gota de agua, y realizamos la extensión o frotis. 
5. Secar al aire 
6. Fijamos con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama azul del mechero
7. Teñimos con cristal violeta durante 1-2 minutos 
8. Lavamos con agua destilada 
9. Secamos la preparación apoyándola sobre una superficie inclinada sobre papel
10. Observamos al microscopio primero con el aumento de 10x para hacer un barrido y después con el de 100x al que añadimos una gota de aceite inmersión

- Bacteria de yogurt

1. Flameamos el asa de siembra 
2. Con el asa flameada tomamos una pequeña porción del líquido que hay en el yogur y realizamos una extensión en un porta limpio
3. Secamos al aire
4. Fijamos con calor pasando el porta 3 veces por la llama azul del mechero
5. Teñimos con azul de metileno durante 1-2 minutos 
6. Lavamos con agua destilada 
7. Secamos la preparación apoyándola sobre una superficie inclinada y sobre un papel. 
8. Observamos con el objetivo de 10x para hacer un barrido y después con el de 100x añadiéndole una gota de aceite de inmersión

- Ultra leviura 

1. Flameamos el asa 
2. Con el asa flameada depositamos una gota de agua estéril en el porta limpio
3. Flameamos el asa de nuevo 
4. Cogemos una pequeña porción de ultra leviura, la suspendemos y la homogeneizamos en la gota de agua
5. Dejamos secar al aire
6. Fijamos la preparación pasándola 3 veces sobre la llama azul del mechero 
7. Teñimos con safrinina durante 1-2 minutos 
8. Lavamos con agua destilada 
9. Dejamos secar la preparación 
10. Observamos al microscopio con el objetivo de 10x para hacer un barrido y después con el de 100x añadiendo una gota de aceite de inmersión

Precauciones 

- Debemos colocar la gota de agua en el portaobjetos si la muestra es sólida, para poder homogeneizarla y que se tiña bien; pero si la muestra es líquida, no debemos depositar la gota de agua en el porta. 

- Para observar las bacterias debemos tener el diafragma abierto y el condensador alto. 

Todas las bacterias se ven con el objetivo de 100x

Observación