Práctica 11: Batería de pruebas de APIS 20

Batería de pruebas de APIS 20

Objetivo
 El objetivo de esta prueba es realizar las pruebas bioquímicas para identificación de bacterias gram negativas y ver de que microorganismo se trata.

Fundamento y significado clínico
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias gram -. Consta de 21 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. 
Presenta las ventajas de que es rápido, eficaz y permite realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira API 20E consta de 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. 
Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos en solución salina, que rehidratan los medios.
Las tiras se incuban a 37ºC y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.

Materiales
  • Galería API20 E

  • Cámara húmeda



  • Mechero bunsen


Muestra
  • Proteus


Reactivos
  • Suero salino fisiológico

  • Fenilalanina (TDA)

  • Voges Proskauer

  • Reactivo de James


Aparataje
  • Estufa


Procedimiento
- Preparación de la suspensión
  1. Con una pipeta estéril cogemos una colonia asilada de nuestra muestra, que en nuestro caso es Proteus
  2. Resuspendemos la colonia en 5 mL de suero salino fisológico y mezclamos



- Siembra de la galería API
  1. Introducimos la suspensión en los tubos de la galería con la misma pipeta de la suspensión
  2. Cuando nos aparezca en la galería los pocillos que están rodeados por un cuadrado (menos la parte de arriba), llenamos el tubo y la cúpula (CIT, CP, GEL)
  3. Para todas las demás llenamos solo el tubo
  4. Para los pocillos que tengan una línea debajo, creamos una atmósfera anaerobia añadiendo a la cúpula parafina líquida (ADH, LDC, OCD, H2S, URE)
  5. Llenamos los pocillos de la cámara con agua destilada 
  6. Colocamos la tira en su cámara húmeda y la cerramos
  7. Incubamos a 37ºC durante 24 horas







Lectura y resultados
Antes de hacer la lectura, añadiremos algunos reactivos en algunos pocillos:
- Fenilalanina (TDA)
Añadimos unas gotas de FeCl3 a los pocillos que tengan debajo las letras TDA
- Voges Proskauer
Añadiremos una gota de reactivo 1 (KOH) y una gota de reactivo 2 (OH) a los pocillos que tengan debajo las letras VP
-Indol
Añadiremos una gota de reactivo de James en los pocillos que tengan debajo las letras IND
-Glucosa
Añadimos una gota de NIC 1 y de NIC 2, lo que nos aparece nitrato positivo.



-Determinación de positivos y negativos y del perfil numérico
En la hoja de resultados los test están agrupados en grupos de 3. 
Las negativas valen 0 y las positivas la primera del triplete vale 1, la segunda vale 2 y la tercera vale 4; se suman todos los valores del triplete.

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