Práctica 2: Preparación de medios de cultivo en placa y tubo

Preparación de medios de cultivo en placa y tubo

Objetivo 
Preparar un medio de cultivo para que durante el curso podamos transferir microorganismo o recuperarlos

Materiales 

• Vidrio de reloj o papel de aluminio 
• Espátula 
• Probeta 
• Pipeta
• Matraz erlenmeyer 
• Tapón para el matraz erlenmeyer
• Imán 
• Varilla recoge-imanes 
• Placas de petri 
• Tubos de ensayo 
• Gradilla 
• Tapones para los tubos 
• Mechero bunsen 

Reactivos 

• Agua destilada

• Medios de cultivos deshidratados (agar nutritivo)

Aparataje 

• Balanza 

• Placa calefactora-agitadora 

• Autoclave 

Procedimiento 

1. Vamos a preparar 250 mL de medio de cultivo, para ello lo primero que debemos hacer es pesar el medio de cultivo deshidratado. Para calcular el peso del medio de cultivo, buscamos los datos en el bote, que pone que por cada litro de disolvente añadimos 40 gramos de medio de cultivo; como necesitamos 250 mL, solo echaremos 10 gramos de medio de cultivo. 
2. Pesamos los 10 gramos de medio de cultivo en con la ayuda de un vidrio de reloj y una espátula
3. Preparamos 250 mL de agua destilada en una probeta
4. Preparamos un vaso erlenmeyer en el añadimos un poco de esos 250 mL de agua preparados y después añadimos el medio de cultivo, movemos y terminamos de echar el resto de los 250 mL. Al final movemos muy bien con una varilla agitadora. 
5. Enchufamos la placa calefactora, mientras añadimos la pulguita (imán) al vaso erlenmeyer. Depositamos el matraz en la placa y subimos la temperatura a no mas de 80ºC y las r.p.m no muy altas. El matraz debe estar tapado ( no del todo), con un tapón, ya que cuando esté en la placa puede empezar a hervir y derramarse. 
6. Dejamos el matraz en la placa hasta que el medio sea transparente. 
7. Sacamos la pulguita del vaso erlenmeyer con el recoge-imanes. A continuación, como no hay papel de aluminio utilizamos bolsas del autoclave para autoclavar los medios. Preparamos el autoclave.
8. Etiquetamos los tubos y los llenamos entre 5 y 7 mL, los cerramos con el tapón y los ponemos en las gradillas. El resto de medio lo dejamos en el vaso erlenmeyer que está tapado con su tapón. 
9. Metemos los tubos y el vaso erlenmeyer en el autoclave; no nos podemos olvidar de abrir un poco el tapón. 
10. Encendemos el autoclve y lo dejamos durante 10-15 minutos durante 120º. 
11. Sacamos los erlenmeyer y los tubos, y cerramos los tapones inmediatamente. Dejamos enfriar hasta unos 45-50º. 
12. Encendemos el mechero bunsen, para crear una zona estéril. 
13. Colocamos los tubos inclinados en una superficie para obtener el medio en slant ( o tubo de flauta). 
14. Etiquetamos las placas petri y las llenamos. Para llenarlas destapamos el vaso erlenmeyer, flameamos la boca y depositamos un poco en cada placa, la tapamos y la meneamos. 
15. Dejamos que los medios se solidifiquen y después les damos la vuelta. 
16. Los almacenamos en cajas y los tubos en gradillas y lo guardamos todo en el frigorífico. 

Errores

- Cuando pusimos el vaso erlenmeyer en la placa calefactora, se nos quemo el medio. Después probaron otros medios, que también se quemaron.

- Cuando autoclavamos por primera vez, nos dimos cuenta de que los medios en los vasos erlenmeyers no eran estériles, así que tuvimos que volver a autoclavar.