Práctica 14: Coprocultivo y APIS 10

febrero 03, 2020

COPROCULTIVO Y APIS 10

Objetivo

El objetivo de la práctica es investigar que microorganismo contiene nuestra muestra problema

Fundamento

Varios microorganismos como protozoos, bacterias y virus pueden causar cuadros gastrointestinales: Diarreas, que a veces se acompañan de vómitos, dolor abdominal y fiebre.

Ante sospecha de gastroenteritis bacteriana se realiza un coprocultivo (cultivo de heces) que permita aislar e identificar al microorganismo responsable del proceso diarreico.

Significado clínico

El coprocultivo se realiza para localizar, en el conjunto de la flora, los microorganismos patógenos, que algunas veces son muy abundantes y llegan a suplantar a la flora normal, pero que en otras ocasiones son poco numerosos con lo cual es difícil su localización.

Es importante conocer datos sobre el paciente que puedan orientar hacia la búsqueda de un determinado germen.

Materiales

Hisopo estéril

Mechero bunsen

Galería APIS 10

Cámara húmeda

Pipetas pasteur estériles

Muestra

Inóculo de heces

Reactivos

Agar Sangre

Agar S-S

Agar Hektoen (2)

MCkoney

Caldo selenito

Reactivo TDA

Reactivo de James

NIT 1 y NIT 2

Aparataje

Estufa

Procedimiento coprocultivo

1.Hacemos el inóculo de heces con 5 mL de SSF al que le añadimos Klebsiella y E.Coli y lo metemos en la estufa
2.Sembramos todas las placas de la misma manera:

- Primero mojamos un hisopo estéril en el incóculo

- La siembra se realiza haciendo una estría con el hisopo desde un borde de la placa hasta el medio para descargar y se siembra por agotamiento de estrías sobre la primera estría

- Después cogemos un asa de siembra y sembramos el resto de la placa firmando en los extremos libres

3. Cuando terminemos la siembra de las placas, metemos el hispo en el caldo selenito y lo cerramos

4. Incubamos las placas y el caldo a 37ºC durante 24 horas

5. Cuando hayan pasado las 24 horas, sembramos una placa de agar Hektoen con el hisopo que teníamos en el caldo selenito.

Procedimiento de APIS 10

1. Decidimos de que placas vamos a aislar las colonias que utilizaremos en las galerías. En nuestro caso, cogeremos las colonias de las placas de Agar S-S y Agar Hektoen.

2. Hacemos dos inóculos, cada uno con 5 mL de SSF. En el primer inóculo añadimos una colonias de la placa de Agar S-S y en el segundo inóculo una colonia de la placa de Agar Hektoen.

3. Incubamos los inóculos durante 10 minutos en la estufa

4. En las dos galerías vamos a hacer lo mismo:

- Con un pipeta pasteur estéril cogemos del bote del inóculo y vamos rellenando la galería. Aquellos que tengan un cuadrado las llenamos enteras y todas las demás solo el tubo.

- Cuando terminemos, a las que tengan una línea debajo le añadimos vaselina para crear un ambiente anaerobio

5. Ponemos las galería en las cámaras húmedas, que tienen agua dentro, e incubamos durante 24 horas a 37ºC.

Lectura y resultados de coprocultivo

Vemos los resultados de todas las placas y el caldo selenito:

- Agar sangre: Bacteria gamma hemólisis

- Agar S-S: E.Coli

- Agar Hektoen: Colonias naranjas: E.Coli / Verde: Salmonella o Proteus

- XLD: E.Coli

- MConkey: Bacteria lactosa negativa

- EMB: Colonias brillantes: E.Coli / Colonias restantes: Salmonella

Lectura y resultados de APIS 10

- Añadimos una gota de reactivo TDA, al TDA

- Añadimos una gota de NIT 1 y otra de NIT 2 a GLU

- Añadimos una gota de reactivo de James a INDOL

Comprobamos todas las pruebas y las apuntamos. Al sumar todos, buscamos el código que corresponde al microorganismo, en nuestro caso es un Citrobacter.