Práctica 8: Tinción de Ziehl Neelsen

Tinción de Ziehl Neelsen

Objetivo
Determinar las ácido alcohol resistentes de las micobacterias en muestras clínicas 

Fundamento
Algunas bacterias, denominadas ácido-alcohol resistentes, presentan una pared celular muy rica en ácido grasos de cadena larga, denominados ácido micólicos, que la hacen resistente a la decoloración con alcohol ácido, una vez que han sido teñidas con colorantes básicos. Las Mycobacterias (M. tuberculosis, M.Lepre, M.Phlei,...), el género Nocardia y un parásito como Cyptosporidium son ejemplos de bacterias ácido alcohol resistentes ( BAAR).

Materiales 
  • Portaobjetos

  • Asas de siembra

  • Pinzas de madera

  • Mechero bunsen 

  • Hisopo con algodón graso

Muestra
  • M.Phlei

Reactivos
  • Fucsina Feniciada
  • Decolorante (Alcohol ácido)
  • Azul de metileno 

  • Agua destilada

Procedimiento 
- Extensión
  1. Encendemos el mechero bunsen para crear un ambiente estéril
  2. Flameamos el asa de siembra 
  3. Cogemos el agua destilada y ponemos una gota sobre el porta 
  4. Cogemos el microorganismo con el asa de siembra. Al estar en tubo, antes de cogerlo flameamos al boca del tubo y lo cogemos, después volvemos a flamear y cerramos el tubo.
  5. Homogeneizamos el microorganismo con la gota de agua sobre el porta y hacemos una extensión
  6. Dejamos secar al aire
  7. Fijamos con la llama azul del mechero




- Tinción
  1. Colocamos la preparación sobre las paralelas
  2. Cubrimos la preparación con fucsina fenicada durante 1 minuto en frío
  3. Calentamos la preparación con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama de mechero durante 5 minutos a partir de la emisión de vapores
  4. Lavamos con agua
  5. Decoloramos con alcohol ácido durante 30 segundos hasta eliminar el color rojizo
  6. Realizamos la tinción de contraste con azul de metileno durante 1-2 minutos 
  7. Lavamos con agua
  8. Secamos 
  9. Observamos al microscopio con el objetivo de 100x



Observación
No vimos nada al microscopio



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